Efeitos Transformantes do Bisfenol-A e Medroxiprogesterona em Células Epiteliais da Mama

Por: Lívia de Paula Peres (Mestra/PPIPA)
Editora: Vanessa Resende Souza Silva
   

Um estudo realizado no Laboratório de Imunobiologia dos Tumores e Osteoimunologia da Universidade Federal de Uberlândia mostrou que células epiteliais da mama não maligna, MCF-10A (SOULE et al., 1990), tratadas com Bisfenol-A (BPA) na concentração de 10 µM durante 12 dias e associadas no 12º dia à Medroxiprogesterona (MPA) na concentração de 200 µM por 96 horas induziram fatores relacionados à invasão, como: Metaloproteinases 2 e 9 (MMPs) (Figura 1 A e B) e a expressão de CXCR4.

A capacidade de invasão foi avaliada pelo ensaio em Transwell com Matrigel® e SDF-1α/CXCL12. O SDF-1α/CXCL12 é ligante específico do receptor de quimiocina CXCR4 que está associado ao crescimento tumoral, invasão e metástase (DEWAN et al., 2006;  KINGSLEY et al., 2007;  NGUYEN; BOS; MASSAGUE, 2009). Durante o ensaio, SDF-1α/CXCL12 se ligou às células que apresentaram CXCR4, sugerindo a presença deste receptor nas MCF-10A tratadas com BPA/MPA.

Comparamos a capacidade de migração/invasão das MCF-10A tratadas com a linhagem tumoral da mama, MDA-MB-231, fenótipo triplo negativo e agressivo. Observamos aumento da capacidade de migração/invasão nas MCF-10A, principalmente no tratamento BPA 10 µM/MPA, na presença de SDF-1α/CXCL12, comportamento semelhante ao da célula MDA-MB-231 (Figura 2 A, B e R).

A expressão de alguns genes relacionados a transição epitélio mesênquima foram comprovadas através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). No entanto, identificamos pequenas alterações dos receptores dos fatores de crescimento, como a diminuição de EGFR1 e aumento de HER2.

O aumento da migração e invasão levanta a suspeita de perda das características epiteliais das MCF-10A. Sendo assim, a expressão do marcador epitelial E-caderina foi avaliado e notamos que o tratamento com BPA 10µM/MPA teve a maior redução da expressão dessa molécula de adesão.

Bisfenol-A (BPA) e Medroxiprogesterona (MPA) são disruptores hormonais (GAO et al., 2015) e hormônios (GHATGE et al., 2005), responsáveis ​​por alterações na proliferação, apoptose, migração e invasão celular que contribuem para o desenvolvimento e progressão do câncer de mama. Quando associados tiveram a capacidade de alterar as MCF-10A, in vitro, conferindo propriedades/características tumorais, tais como: aumento da expressão de proteínas envolvidas em metástases, aumento da capacidade de migração, diminuição da regulação do gene CDH1 marcador epitelial, aumento da expressão do gene CDH2 considerado marcador mesenquimal e degradação da matriz extracelular pela expressão das MMP-2 e MMP-9.

Figura 1. Superexpressão de MMP-2 e MMP-9 nas MCF 10A. A. Aumento da expressão de MMP-2 nos tratamentos com BPA 1 µM/BPA, BPA 10 µM e BPA 10 µM/MPA. O tratamento com baixas doses de BPA não mostra alterações em A enquanto que em B já é observada pequeno aumento. Redução da expressão das MMPs no tratamento com DMSO foi vista tanto em A quanto em B. B. A expressão de MMP-9 também mostrou aumento nos mesmos tratamentos que da MMP-2. Porém, discreto aumento da expressão no tratamento MPA foi observado em B. Dados comparados em relação ao controle (*P<0,05).

Figura 2. Migração e invasão de células MCF-10A após tratamento com BPA/MPA. A. Representação gráfica da migração/invasão da MDA-MB-231. MDA-MB-231 mostra alta capacidade de invasão na presença ou ausência de SDF-1 α/CXCL12, sendo que com SDF-1α/CXCL12 observamos um aumento ainda maior desse fenômeno, possivelmente pela expressão de CXCR4 (***P< 0,0001). B. Representação gráfica da migração das MCF-10A tratadas. A linhagem epitelial da mama MCF-10A após tratamento com BPA/MPA comporta-se de maneira semelhante à MDA-MB-231 (*P< 0,05). C a R. Ensaio de migração em Transwell. As fotos C e D representam o processo de migração e invasão da linhagem tumoral MDA-MB-231 na ausência e presença de SDF-1α/CXCL12. R. MCF-10A tratada com BPA 10µM/MPA migram/invadem mais na presença de SDF-1α/CXCL12. Houve migração/invasão nos demais tratamentos porém, em menor quantidade com relação ao BPA 10 µM/MPA. As setas pretas indicam os poros do Transwell, as setas vermelhas as células que migraram e as setas amarelas as células que invadiram. Fotos retiradas em microscópio de captura no aumento de 10X, obtidas de dois experimentos independentes.

REFERÊNCIAS

DEWAN, M. Z.  et al. Stromal cell-derived factor-1 and CXCR4 receptor interaction in tumor growth and metastasis of breast cancer. Biomed Pharmacother, v. 60, n. 6, p. 273-6, Jul 2006.

GAO, H.  et al. Bisphenol A and hormone-associated cancers: current progress and perspectives. Medicine (Baltimore), v. 94, n. 1, p. e211, Jan 2015.

GHATGE, R. P.  et al. The progestational and androgenic properties of medroxyprogesterone acetate: gene regulatory overlap with dihydrotestosterone in breast cancer cells. Breast Cancer Res, v. 7, n. 6, p. R1036-50,  2005.

KINGSLEY, L. A.  et al. Molecular biology of bone metastasis. Mol Cancer Ther, v. 6, n. 10, p. 2609-17, Oct 2007.

NGUYEN, D. X.; BOS, P. D.; MASSAGUE, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer, v. 9, n. 4, p. 274-84, Apr 2009.

SOULE, H. D.  et al. Isolation and characterization of a spontaneously immortalized human breast epithelial cell line, MCF-10. Cancer Res, v. 50, n. 18, p. 6075-86, Sep 15 1990.